Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1M-糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次显现出家兔自身抗锥体到显现出1M-癌症流行病学病征的方面叛将在儿童时期就有很好的刻画，多个家兔自身抗锥体感染性的儿童中都有70%在血清匹配后10年中患上癌症，而随访15年的儿童这一人口比例增高到84%。相对于之下，占流行病学1M-癌症一半以上的M-1M-癌症的得病机制还没有得不到适当的研究成果。

日益多的人开始用于分期系统来表述1M-癌症的方面：个锥体在显现出多种家兔自身抗锥体时进到第1下一阶段，显现出食欲异常时进到第2下一阶段，显现出病征时进到第3下一阶段。一些多发家兔自身抗锥体感染性的个锥体，在1期和2期，方面较很慢，并转变为得病的1M-癌症。我们在此之后刻画了一四组在首次监测到多种家兔自身抗锥体样本后至少10年无癌症的却是很慢方面者，这四组病患者总人数少，但不同之处更为一致。随后，我们辨认出家兔诱发特异性CD8+T蛋白质叔父化在方面较快的病患者中都基本不实际上，但在未来会得病和长期实际上的癌症病患者中都很很难监测到。这可能会暗示，与方面病患者相对于，这些病患者诱发质叔父化的适度增强。

早期研究成果暗示，尽管适度性T蛋白(Treg)数量长时间，但癌症病患者实际上一些功用缺点，其中都包括对IL-2的质叔父化潜能提高。此外，癌症病患者中都的现像CD4+T蛋白可能会对适度兼具抵抗性，展示出为现像T蛋白的选择性消散，人为造成的Treg和锥游离造成的诱发Treg，以及免疫境况的CD4+T蛋白中都IL-2质叔父化消散。本研究成果的目的是刻画了CD4+适度性T蛋白(Treg)在一小群却是较快方面者中都的不同之处，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以人群基础上的垂直研究成果，在21岁都有肺癌的病患者亲属中都检查1M-癌症的危险诱因。我们在此之后刻画了长期较快方面者的不同之处，他们保持多重家兔自身抗锥体感染性至少10年，但没有显现出癌症的流行病学病征，很慢性或非性功用诱发。随后，10名继续保持无癌症并主动缺少大量血液样本的较快方面者纳入T和B蛋白功用数据分析。在目前的研究成果中都，8名很慢方面者(SP四组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的家兔自身抗锥体感染性。所有的举例来说都保持稳定1M-癌症方面的1期，尽管一些人随后一落千丈了家兔自身抗锥体对某些免疫的感染性质叔父化，然而，一名病患者在此之后保持稳定2期至少6年，但没有显现出流行病学病征，一名病患者被诊断为癌症，该人会72岁，在采集实验者样本时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在的测试中都对该酪氨酸进行时了单独评估。分离出来外周血单个质子蛋白(PBMCs)，采用多实例流式蛋白术和T蛋白选择性试验评估酪氨酸中都Treg的频叛将、展示出M-和功用。用于FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和转回)进行时无督导聚类数据分析，评估Treg展示出M-。

结果：与身心健康酪氨酸相对于，来自很慢方面锥体的心灵CD4+T蛋白的督导聚类说明了，转录的心灵CD4+ Treg频叛将增高，与糖皮质激素诱发的TNFR特别蛋白(GITR)传达增高有关。一名HbA1c上升的病患者与方面较快者和匹配的对照四组相对于，Treg谱不尽相同。功用数据分析暗示，与身心健康酪氨酸相对于，来自较快方面锥体的Treg介导的CD4+现像T蛋白选择性相对于损毁。展示出为对现像CD4+T蛋白CD25和CD134传达的选择性增高。

所示1 深入的展示出M-数据分析说明了，CD4+Treg亚M-在很慢方面数据流中都增高。由FlowSOM分解的Treg二楼，四组织起来在来自所有酪氨酸的来生CD4+CD45RA -蛋白上。根据标示出物传达解剖出10个元簇:心灵T蛋白_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T蛋白;HLA-DR + GITR +心灵T蛋白;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用于9个不同Treg标示出分解的10个元簇的MST。每个节点代表者一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在节点四组周围上色。每个节点中都的面包所示声称单个标示出的传达级别。(b)每个元聚类的热所示，以说明了整锥体标示出传达。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)分解所示，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)比起重元素为每个metacluster装有该线所示(重元素> 0.05%)确认为HD和SP四组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T蛋白(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T蛋白(l)。橘色白点代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用于CITRUS的预测模M-证明，Treg频叛将的增高是方面较快的标志。分级门控(a - f)和棉花数据分析(g-k)尤其SP举例来说和匹配的HD举例来说在CD4+CD45RA−T蛋白上的相似之处。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群锥体的代表者性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR传达进行时分离出来，仿真FlowSOM群锥体。(b) HD(外缘)和SP(杂色)四组以及酪氨酸SP 606(橘色)中都CD25+ cd127的频叛将汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的装有该线所示;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突出的簇被定位为SP和HD数据流相互间的不同。(j)装有该线所示说明了了在SP(杂色)和HD(灰点)四组中都，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的比起重元素(人口比例)。(k)直方所示说明了每个簇的展示出M-(粉红色)和Treg标示出比起传达与历史背景传达(深蓝色);上列，缓存Treg_3;下面即刻，缓存Treg_4。历史背景与所有其他簇中都标示出的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写秩检验

所示3 与身心健康献血者相对于，方面较快者心灵treg的GITR增高。每个心灵CD4+T蛋白元簇(心灵T蛋白_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T蛋白;HLA-DR + GITR +心灵T蛋白;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个传达标示出的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)数据流的传达热所示(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR传达串联，说明了直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon配对小写秩和检验，p< 0.07(橘色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(深蓝色)酪氨酸SP 606和匹配的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR传达，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)串联，说明了直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写秩检验

所示4 来自较快方面的CD4+ treg蛋白操控现像CD4+T蛋白的潜能提高。SP四组用深蓝色的该线和白点声称，HD四组用粉红色的该线和白点声称，橘色的该线/白点声称酪氨酸sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白进行时分选。CD4+CD25−(此番者)被标示出为CFSE, Treg按捕捉到的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠转录蛋白，培养出来3当晚进行时流式蛋白术监测。(a-d)与CD4+此番者比起应的treg培养出来(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性百份。用于感染性对照(转录的响应蛋白含treg)计算选择性百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

所示5 现像CD4+T蛋白对较快方面的T蛋白转录的选择性更敏感性。SP四组用深蓝色的该线和白点声称，HD四组用粉红色的该线和白点声称，橘色的该线/白点声称酪氨酸sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白进行时分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标示出，treg按捕捉到的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠转录蛋白，培养出来3当晚进行时流式蛋白术(CD25反染)和蛋白因叔父数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性百分叛将(b)。(c,d) CD25选择性百分叛将(c)和CD134选择性百分叛将(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来中都的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重尤其测试

论点：我们得出的论点是，来自较快方面叔父的转录心灵CD4+Treg在GITR传达中都得不到了扩展和丰富，强调了必要性研究成果Treg在1M-癌症风险个锥体中都的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28